我院消化科与山东大学生命科学院有一个合作研究课题,《胃肠道病原菌与肿瘤发生发展关系的研究》。人类胃肠道微生态是由约 1013 ~ 1014 个微生物组成的复杂生态系统。 在长期的进化过程中, 这些微生物逐渐形成与宿主相互依赖、 相互制约的关系。 因此, 构成胃肠道菌群的各类细菌成员维持种类和数量的动态平衡, 有利于人体胃肠道微生态的稳定。 研究发现, 胃肠道微生态平衡的破坏加速了胃癌和结直肠癌的发生和发展。近年来微生态平衡破坏的研究成为除基因突变和遗传因素外, 胃癌和结直肠癌发生发展机制研究的另一热点, 并可能为胃癌和结直肠癌的治疗提供新的方向本课题的研究目的:1用生物信息学的方式对比分析结肠癌患者肠道菌群宏基因组的差异,从中发现一种或者几种影响结肠癌发生的致病菌群。2分析致病菌和宿主黏膜细胞之间的识别和相互作用,以及引起宿主内细胞生理生化的一系列变化,从而阐明细胞癌变的诱发机制。3分析致病菌和宿主细胞的转录组变化,从而确定致病菌和宿主相互作用靶点。4进行致
病菌和肿瘤患者的血液代谢组学研究,了解肿瘤形成的微环境。
癌症患者及正常志愿者人群筛选:考虑到本实验是研究结肠癌的发生发展与肠道菌群的关系,肠道菌群的影响因素较多,如生活地域、年龄、BMI、肠道慢性疾病(溃疡性结肠炎、肠息肉)、高脂肪高蛋白饮食、应用抗菌药物等。本研究制定结肠癌及正常志愿者筛选标准。正常志愿者需排除长期肠炎病史,无慢性便秘,无呼吸泌尿心血管及神经系统基础疾病,排除胃肠道外消化系统疾病,且肠镜检查前3个月内没有连续使用抗菌药物超过3天。结肠癌入选者也要排除上述情况。
本研究涉及的志愿者,为2018年10月-2019年10月在我院行结肠镜检查,从病情诊断确诊后的患者中随机选择。分组:肠镜检查健康组、结肠腺瘤组、结肠腺癌组。三组患者的性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。所有研究对象在实验前均告知并签署知情同意书,并经医院伦理委员会批准同意。
1、粪便标本采集及处理
粪便标本在肠镜检查前留取,取材后立即放入厌氧培养基中,然后浸入液氮。实验内容:粪便细菌培养检查及鉴定 ;基因组DNA提取;PCR扩增及纯化;高通量测序分析
2、血清标本采集及处理
血清D-乳酸和内毒素监测 采集三组患者外周静脉血,分离血清,采用ELISA法检测D-乳酸和内毒素水平
3、本实验拟先根据肠镜检查结果和简要病史选出结肠癌患者、结肠腺瘤组及肠镜检查健康组,即时肠镜下取材,-80°C冰箱保存。患者钳取癌区和癌旁黏膜(5-8cm),腺瘤及腺瘤旁黏膜(5-8cm),正常志愿者则钳取升、横、降结肠三个位置黏膜。实验内容:总基因组DNA提取;基因PCR;PCR产物的变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析。
4、结肠癌标本分析.实验内容:总基因组DNA提取;基因PCR; PCR产物的变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析。
本课题通过对胃癌及结肠癌患者的血液,粪便及组织标本进行分析,阐述肠道菌群与消化道肿瘤的关系,为胃癌和结肠癌的治疗提供新思路和新方法。